多快？3-5个工作日完成！
多贵？低于700元/样本的价格！
多准？高于Sanger 的序列结果！
为什么选择5’RACE方法进行扩展？
大家都知道， 分析可变区时，设计一个通用引物来扩增所有的抗体序列是异常困难的。重链和轻链5’端的天然可变性决定了序列同源性很低。这也就决定了在5’端设计多条引物的多重PCR法，先天性地会遗漏部分抗体可变区序列，造成结果不够全面。一个有效的分析这些可变区域的方法是在可变区下游的保守区设计简并引物。后续可以使用5’RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)方法克隆这段目的区域，之后再进行测序。 使用SMARTer RACE cDNA扩增试剂盒，在反转录过程中将SMARTer II A寡核苷酸添加到cDNA的末端， 使得该位点能够用于下游扩增和克隆 。 使用SMARTer RACE kits具有足够的灵敏度，可以获得全部5’端的信息。
以合成的cDNA作为模板， 根据NCBI核酸数据库注册的lgG的序列，设计了针对H链, L (κ)链, 或L (λ)链的反转录引物（RT primer）以及RACE PCR所需的反向引物（5′ RACE primer）进行扩增，得到带有VDJ可变区全部序列的DNA片段。 取一部分PCR反应液进行琼脂糖凝胶电泳确认片段长度大小，应集中于550bp长度附近。扩增产物再进行下一步的测序工作得到其对应的抗体序列。
为什么选择Miseq测序平台？
Miseq测序平台是illumina公司于2011年推出的小型测序平台，并于2018年获得中国国家药品监督管理局(CNDA)的批准文书用于临床体外诊断检测。从推出至今，已服务超过十年的DNA测序需求，其数据的准确度高，测序通量大和单碱基测序成本低等特点，持续地被各大医院，临检公司等使用。
Miseq测序平台是目前唯一能够提供高质量的600bp读长的二代测序设备。这个读长也正好满足了上述5’RACE建库得到的扩增产物测序。由于Miseq测序平台一次能够完成对上千万条片段进行测序，其通量可以实现大规模单克隆样本的测序或者免疫组库测序，且其单位测序成本远低于Sanger方法的成本。
苏州百达提供的服务
基于5’RACE全面准确的建库方法和Miseq测序平台的高质量，高通量的测序能力，我们能够提供快速准确地抗体基因发现服务：
