
准备样本
准备样本应该遵守代表性,准确性,迅速性和低温原则,保证所取样本具有实验代表的科学意义,并能防止样本在实验前降解,影响实验数据准确性。
样品包装
- 利用铝箔或进口冻存管包裹样本,用油性记号笔在其表面标明样本编号等信息,并且不要与乙醇等有机溶剂接触;
- 不要用纱布(样本易粘附在纱布上)、纸张(低温冻存易碎)直接包裹样本;
- 不要用玻璃或密封性不好的容器在液氮中保存样本(玻璃器皿或密封性不好的容器从液氮中取出后会发生爆炸);
- 样本包装不要使用透明胶带(胶带在低温条件下粘性减弱,易掉落);
- 不要把标签纸或其他纸制的说明性文件放入样本袋内,因为纸张在液氮中易碎。
样本采集与存储
- 组织样本采集后,迅速放入进口冻存管中,拧紧后立即放入液氮,再转移到-80℃中保存;
- 细胞样本去除培养液后,经 Trizol 或 Lysis/Binding Solution 处理后储存于-80℃冰箱中或干冰运输。在-20℃冰箱中储存不宜太久;悬浮细胞按照每 105-107 个细胞加 1ml的TRIzol 的比例加入 TRIzol 试剂,使用移液器 Tip 头反复吹打细胞直至看不见成团的细胞块;贴壁细胞按每10cm2(相当于六孔板一个孔或 35mm 直径培养皿)细胞加 1ml的TRIzol的比例加入 TRIzol 试剂 ;Trizol溶解细胞样本进行RNA提取,Trizol的量最好控制在1.5ml以内,超过1.5ml时一个提取反应体系无法全部提取;
- 未分离白细胞的全血样本操作进行RNA水平研究。建议在8小时之内进行RNA提取,如果没有RNA提取条件建议使用 PAXgene 全血采血管(BD)采血和保存;对于全血样本,另外一个快速处理的方式就是将全血样本直接按照体积1:5(Trizol越多越好)的方式投入到Trizol中,干冰运输就行,注意会有一定的降解风险,全血样本需要500ul以上的量;
- 分离白细胞的全血样本操作用于RNA水平研究 。全血样本建议使用EDTA抗凝管采集, 并反复颠倒混匀几次,使血液充分抗凝后,进行白细胞分离处理,并将白细胞放入Trizol中, 使用移液器Tip头反复吹打细胞,直至看不见成团的细胞块,使之充分溶解于 TRIzol 中形成清亮不粘稠的液体,并全部转移至标记好的进口冻存管,干冰运输或保存; 推荐使用EDTA抗凝管采血,由于肝素会抑制下游PCR反应,严禁使用肝素抗凝管采血;
- 单细胞处理及下游的RNA研究, 提前在200μL 的RNase-free平盖低吸附PCR 管中分装加入百达提供的10×Sample Buffer; 细胞培养结束后,无菌条件分离出细胞移至200μL 的含有试剂的RNase-free平盖低吸附PCR 管中(建议在分离单细胞时也设置自己的阴性对照,来帮助检验自身的操作过程和实验环境是否有污染);使用微量移液器轻轻吹打混匀,切勿涡旋;瞬时离心,将样品收集至管底;将样品用液氮速冻成型,或存放于-80℃冰箱中,保证管内液体成固态。注意:细胞培养和分离过程中使用的培养基和其他试剂的组分可能会抑制下游的酶促反应,因此,请尽量减少不必要的样品体积,或使用无Ca2+ 、Mg2+的缓冲液漂洗细胞。
样本运输
- 干冰运输
- 所有样本(除去客户需要保持活性的样本)都可以用干冰运输,但用于RNA检测的样本必须使用干冰运输,用于DNA检测的样本可酌情处理;
- 24 小时到达的,干冰数量不得低于 5 公斤;大于24小时到达的,建议保证每天3公斤的干冰数量。夏季可以适当再多增加部分干冰(平时的 1.5 倍)。
- 冰袋运输(能确保样本在 24 小时内送达 )
- 保存于 RNAlater 中的组织样本 ;
- 保存于 TRIzol 中的细胞样本或经过匀浆的组织样本;
- 用于抽提 DNA 的新鲜抗凝全血样本或其他组织样本;
- 溶于乙醇中的样本或核酸。
快递寄送
- 将用离心管储存的样品用封口膜密封或直接使用进口冻存管储存样本,将所有样本集中保存在一个或几个自封袋/50ml离心管中,自封袋/离心管外标记好客户信息;
- 请仔细填写快递单,运输苏州百达生物科技有限公司,建议顺丰快递邮寄。
- 收样地址如下:
收样地址: 江苏省苏州市工业园区星湖街218号,生物纳米园A5-505收件人:百达生物收样室
电话: 177-0155-8215
邮编:215123