苏州百达生物科技有限公司

免疫组库测序

免疫组库是指在任何指定时间,个体的循环系统内所有功能多样性B细胞和T细胞的总和,又可以细分为B细胞受体库(B cell receptor Repertoire),T细胞受体库(Tcell receptor Repertoire)。免疫组库测序(Immune Repertoire sequencing(IR-SEQ))是以 B/T 淋巴细胞为研究目标,以多重PCR或5’RACE技术目的扩增决定B细胞受体(BCR)或T细胞受体(TCR)多样性的互补决定区(CDR区),再结合高通量测序技术以及生物信息学手段,得到其可变区(VH),多变区(DH),结合区(JH)和恒定区(CH)的基因片段序列信息,全面评估免疫系统的多样性变化,深入挖掘免疫组库与疾病的关系。

我公司利用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术和公司特有的免疫组库特异扩增引物集进行可变区的扩增。通过利用Illumina Miseq测序平台,能够低成本和短周期的完成序列测序工作,得到全面准确的B/T淋巴细胞可变区组成及多样性信息。当前,我司提供人,小鼠,猪,狗,骆驼和兔物种的BCR免疫组测序,及人和小鼠的TCR免疫组库测序。

免疫组库测序服务流程

以RNA为起始材料,使用RACE法对BCR重链/轻链,TCR alpha/beta链分别构建测序文库,然后采用Illumina MiSeq 300PE平台,获得完整的基因可变区序列。

免疫组库测序送样要求

  • RNA 样品总量: ≥2 μg;组织样本(动物):>300 mg;细胞样本:>10万个;
  • 提供样本来源的种属信息 。

免疫组库测序周期和交付结果

  1. 交付周期:10-15个工作日;
  2. 测序数据量:重链轻链各自提供大约0.5-1百万条测序读长(0.5-1M);
  3. 交付结果:
    • 基本数据QC及统计;
    • 比对物种参考抗体基因序列库并进行统计分析;
    • 克隆序列特征注释: CDR1/2/3, FR1/2/3/4核酸序列,氨基酸序列注释;
    • 样本克隆群体特征分析:CDR3序列长度分析,VDJ基因频率统计及V-J基因组合频率分析;
    • 样本间比较分析:测序饱和度分析,样本间相关性分析等。

免疫组库测序服务优势

  • 全方位服务,提供从VDJ扩增,建库,测序和生信分析一站式服务;
  • 采用特有的5′ RACE扩增技术,及准确的扩增引物体,全面提升可变区序列检出;
  • 采用分子标签(UMI)的扩增技术,降低因扩增效率不同所引起的丰都差异;
  • 丰富的分析内容,提供可变区序列,抗体基因,多样本比较等全方位分析服务;
  • 合理的价格及快速的服务周期,帮助客户提高生产效率。